产品货号:
SNM170
中文名称:
羟脯氨酸测定试剂盒(消化法)(测培养细胞、培养液)
英文名称:
Hydroxyproline assay kit
产品规格:
50管/48样
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于血清、体液及各种组织匀浆、细胞培养液、培养细胞等样本中羟脯氨酸(HYP)的检测。
羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色,根据其呈色的深浅可推算出其含量。
保存:2~8℃,避光,有效期6个月。
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羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨基苯甲醛作用呈现紫红色,根据其呈色的深浅可推算出其含量。
羟脯氨酸在胶原蛋白中占13.4%,在弹性蛋白中占极少量,其它蛋白中均不存在。而胶原蛋白大多分布在皮肤、腱、软骨、血管等处,因此羟脯氨酸的量能反映结缔组织疾病的胶原代谢情况。
有人把皮肤中羟脯氨酸的测定作为筛选抗衰老药物的一个指标。在发育阶段随年龄的增长,其羟脯氨酸在尿中排泄增加,而发育停止后稳定。老年人的羟脯氨酸比年轻人要少。
鼠患有自发性高血压及继发性高血压时,尿中羟脯氨酸含量增加。
手术创伤会导致尿羟脯氨酸排泄量的增加,因高脂、低蛋白、酒精中毒及毒物、营养不良,或肝细胞变性坏死,通过炎症使纤维增加,分割肝小叶,导致肝硬化。肝纤维化时,肝内主要增加的成分为胶原纤维,羟脯氨酸为胶原纤维所特有,测定肝羟脯氨酸的含量,可换算成肝胶原蛋白的含量,以反映肝纤维化程度。胶原纤维分解主要依赖胶原酶和其它蛋白酶的作用,其分解产物羟脯氨酸从尿中排出,测定尿羟脯氨酸的含量,可反应胶原降解的情况。通过测定组织及尿中羟脯氨酸的含量,一方面可以判断纤维化程度,同时可以筛选预防与治疗的药物。
组分 | 规格 | |
试剂一 | 粉剂 | 1瓶 |
甲液 | 10mL | |
乙液 | 20mL | |
试剂二 | 30mL | |
试剂三 | 粉剂 | 1瓶 |
溶剂 | 1瓶 | |
试剂四:羟脯氨酸标准品 | 3×5mg | |
消化液 | 粉剂 | 1瓶 |
溶剂 | 3mL |
保存:2~8℃,避光,有效期6个月。
- 试剂一应用液:
临用时取粉剂一瓶,先加甲液10mL充分溶解(从瓶口向内看,完全溶解完)。然后再加乙液20mL充分混匀。配好后的试剂2~8℃保存3个月。 - 试剂三应用液:
临用时将粉剂一支加到60mL溶剂中充分溶解,配好后2~8℃避光保存1个月有效。 - 消化液应用液:
临用前将粉剂倒入溶剂中,并用溶剂将粉剂瓶洗干净,现用现配。 - 标准贮备液:
测试前将一支标准品用双蒸水溶解后定容至50mL,配成100μg/ml的标准贮备液。 - 5μg/ml标准应用液:
取100μg/ml的标准贮备液用双蒸水20倍稀释后,配成5μg/ml的标准应用液,现用现配。
- 消化
- 按下表加入各成分配制消化反应体系
成分 空白管 标准管 测定管 双蒸水 250μL 5μg/ml标准应用液 250μL 待测样本 250μL 消化液应用液 50μL 50μL 50μL - 混匀,37℃水浴3小时。
- 按下表加入各成分配制消化反应体系
- 羟脯氨酸测定
- 向各反应管加入试剂一应用液0.5mL,混匀,室温静置10分钟。
- 向各反应管加入试剂二0.5mL,混匀,室温静置5分钟。
- 向各反应管加入试剂三应用液1mL,混匀,60℃水浴15分钟,
- 流水冷却后,3500转/分离心10分钟,
- 取上清,在550nm处,1cm光径,双蒸水调零,测各管吸光度。
注:若您的样本中所含羟脯氨酸过低,可增加样本取样量或匀浆浓度。 - 向各反应管加入试剂一应用液0.5mL,混匀,室温静置10分钟。
- 计算公式
- 血清(浆)、细胞上清等液体样本计算公式:
羟脯氨酸含量
(μg/mL)= 测定OD值-空白OD值 × 标准品浓度
(5μg/mL)× 样本测试前
稀释倍数标准OD-值空白OD值 - 组织样本计算公式:
羟脯氨酸含量
(μg/克组织)= 测定OD值-空白OD值 × 标准品浓度
(5μg/mL)÷ 样品称重(g) 标准OD值-空白OD值 所加匀浆介质(mL)
- 血清(浆)、细胞上清等液体样本计算公式:
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